一,、步驟
1、制備細(xì)胞懸液:對(duì)于懸液培養(yǎng)的細(xì)胞,,可直接進(jìn)行下面的步驟2(計(jì)數(shù)與計(jì)算過(guò)程),。如果計(jì)數(shù)對(duì)象為貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,首先需將培養(yǎng)物按如下步驟制備成細(xì)胞懸液,。
1),、終止培養(yǎng),將培養(yǎng)液吸出,,用PBS洗培養(yǎng)物一次,。
2)、給培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入1ml 0.25%胰蛋白酶溶液,,于37℃消化3~5min ,。期間不斷在鏡下觀察。當(dāng)細(xì)胞變圓接近脫壁時(shí),,棄消化液,。
3)、加入一定量的培養(yǎng)液(如果這些培養(yǎng)細(xì)胞不再有用,,可加PBS),,用吸管吹打,使細(xì)胞脫壁而制成細(xì)胞懸液,。
2,、計(jì)數(shù)與計(jì)算過(guò)程
1)、在細(xì)胞計(jì)數(shù)板中央放置計(jì)數(shù)專(zhuān)用的蓋玻片,。
2),、用玻璃虹吸管吸取細(xì)胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計(jì)數(shù)板凹蹧處流出懸液,,至蓋玻片被液體充滿(mǎn)為止,。
3)、置顯微鏡下計(jì)數(shù)四角大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù),。對(duì)于壓線(xiàn)的細(xì)胞只計(jì)數(shù)在上線(xiàn)和左線(xiàn)者,,對(duì)于細(xì)胞團(tuán)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)。
4),、按下式計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液的密度:細(xì)胞密度=(4個(gè)大格細(xì)胞總數(shù)/4)×104個(gè)/ml 。
二,、注意事項(xiàng):
1),、務(wù)必使分散成單個(gè)細(xì)胞,取樣計(jì)數(shù)前,,充分混勻細(xì)胞懸液,。
2),、顯微鏡下計(jì)數(shù)時(shí),遇到2個(gè)以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán),,應(yīng)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)算,。如果細(xì)胞團(tuán)>10%,說(shuō)明細(xì)胞分散不充分,。
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