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一,、步驟
1、制備細胞懸液：對于懸液培養(yǎng)的細胞,，可直接進行下面的步驟2（計數(shù)與計算過程）,。如果計數(shù)對象為貼壁生長的細胞，首先需將培養(yǎng)物按如下步驟制備成細胞懸液,。
1）,、終止培養(yǎng)，將培養(yǎng)液吸出,，用PBS洗培養(yǎng)物一次,。
2）、給培養(yǎng)瓶內(nèi)加入1ml 0.25％胰蛋白酶溶液,，于37℃消化3～5min ,。期間不斷在鏡下觀察。當細胞變圓接近脫壁時,，棄消化液,。
3）、加入一定量的培養(yǎng)液（如果這些培養(yǎng)細胞不再有用,，可加PBS）,，用吸管吹打，使細胞脫壁而制成細胞懸液,。
2,、計數(shù)與計算過程
1）、在細胞計數(shù)板中央放置計數(shù)專用的蓋玻片,。
2）,、用玻璃虹吸管吸取細胞，讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計數(shù)板凹蹧處流出懸液,，至蓋玻片被液體充滿為止,。
3）、置顯微鏡下計數(shù)四角大方格內(nèi)的細胞總數(shù),。對于壓線的細胞只計數(shù)在上線和左線者,，對于細胞團按單個細胞計數(shù)。
4）,、按下式計數(shù)細胞懸液的密度：細胞密度＝（4個大格細胞總數(shù)/4）×104個/ml ,。
二、注意事項：
1）,、務(wù)必使分散成單個細胞,，取樣計數(shù)前，充分混勻細胞懸液,。
2）,、顯微鏡下計數(shù)時，遇到2個以上細胞組成的細胞團,，應(yīng)按單個細胞計算,。如果細胞團>10％，說明細胞分散不充分,。
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