血細胞分類計數板的計數方式

 

細胞計數法是用來計數細胞懸液中細胞數量的一種方法。一般利用計數板（血球計數板）進行。即可用于分離（散）細胞培養(yǎng)接種前計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,，也可用于對培養(yǎng)物的細胞數量進行計數。不論計數的對象如何,，均須制備分散的細胞懸液,。

一,、步驟

1、制備細胞懸液：對于懸液培養(yǎng)的細胞,，可直接進行下面的步驟2（計數與計算過程）,。如果計數對象為貼壁生長的細胞，首先需將培養(yǎng)物按如下步驟制備成細胞懸液,。

1）,、終止培養(yǎng)，將培養(yǎng)液吸出,，用PBS洗培養(yǎng)物一次,。

2）、給培養(yǎng)瓶內加入1ml 0.25％胰蛋白酶溶液,，于37℃消化3～5min ,。期間不斷在鏡下觀察。當細胞變圓接近脫壁時,，棄消化液,。

3）、加入一定量的培養(yǎng)液（如果這些培養(yǎng)細胞不再有用,，可加PBS）,，用吸管吹打，使細胞脫壁而制成細胞懸液,。

2,、計數與計算過程

1）、在細胞計數板中央放置計數專用的蓋玻片,。

2）,、用玻璃虹吸管吸取細胞，讓虹吸管在蓋玻片上或下側的計數板凹蹧處流出懸液,，至蓋玻片被液體充滿為止,。

3）、置顯微鏡下計數四角大方格內的細胞總數,。對于壓線的細胞只計數在上線和左線者,，對于細胞團按單個細胞計數。

4）,、按下式計數細胞懸液的密度：細胞密度＝（4個大格細胞總數/4）×104個/ml ,。

二、注意事項：

1）,、務必使分散成單個細胞,，取樣計數前，充分混勻細胞懸液。

2）,、顯微鏡下計數時,，遇到2個以上細胞組成的細胞團，應按單個細胞計算,。如果細胞團>10％,，說明細胞分散不充分。

 

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