細(xì)胞計數(shù)法是用來計數(shù)細(xì)胞懸液中細(xì)胞數(shù)量的一種方法,。一般利用計數(shù)板（血球計數(shù)板）進(jìn)行。即可用于分離（散）細(xì)胞培養(yǎng)接種前計數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量,，也可用于對培養(yǎng)物的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行計數(shù)。不論計數(shù)的對象如何,，均須制備分散的細(xì)胞懸液,。

一、步驟

1,、制備細(xì)胞懸液：對于懸液培養(yǎng)的細(xì)胞,，可直接進(jìn)行下面的步驟2（計數(shù)與計算過程）。如果計數(shù)對象為貼壁生長的細(xì)胞,，首先需將培養(yǎng)物按如下步驟制備成細(xì)胞懸液,。

1）、終止培養(yǎng),，將培養(yǎng)液吸出,，用PBS洗培養(yǎng)物一次。

2）,、給培養(yǎng)瓶內(nèi)加入1ml 0.25％胰蛋白酶溶液,，于37℃消化3～5min 。期間不斷在鏡下觀察,。當(dāng)細(xì)胞變圓接近脫壁時,，棄消化液。

3）,、加入一定量的培養(yǎng)液（如果這些培養(yǎng)細(xì)胞不再有用,，可加PBS），用吸管吹打,，使細(xì)胞脫壁而制成細(xì)胞懸液,。

2、計數(shù)與計算過程

1）,、在細(xì)胞計數(shù)板中央放置計數(shù)專用的蓋玻片,。

2）、用玻璃虹吸管吸取細(xì)胞,，讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計數(shù)板凹蹧處流出懸液,，至蓋玻片被液體充滿為止。

3）、置顯微鏡下計數(shù)四角大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù),。對于壓線的細(xì)胞只計數(shù)在上線和左線者,，對于細(xì)胞團(tuán)按單個細(xì)胞計數(shù)。

4）,、按下式計數(shù)細(xì)胞懸液的密度：細(xì)胞密度＝（4個大格細(xì)胞總數(shù)/4）×104個/ml ,。

二、注意事項：

1）,、務(wù)必使分散成單個細(xì)胞,，取樣計數(shù)前，充分混勻細(xì)胞懸液,。

2）,、顯微鏡下計數(shù)時，遇到2個以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán),，應(yīng)按單個細(xì)胞計算,。如果細(xì)胞團(tuán)>10％，說明細(xì)胞分散不充分,。

 

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