使用方法:
1 血球計(jì)數(shù)板
視待測菌懸液濃度,,加無菌水適當(dāng)稀釋(斜面一般稀釋100倍),以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度,。
2.取潔凈的血球計(jì)數(shù)板一塊,,在計(jì)數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片。
3.將菌懸液搖勻,,用滴管吸取少許,,從計(jì)數(shù)板中間平臺兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴(不宜過多),讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計(jì)數(shù)區(qū),,勿使氣泡產(chǎn)生,,并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計(jì)數(shù)區(qū)上(不要使計(jì)數(shù)區(qū)兩邊平臺沾上菌懸液,,以免加蓋蓋玻片后,,造成計(jì)數(shù)區(qū)深度的升高),然后加蓋蓋玻片(勿使產(chǎn)生氣泡),。
4.靜置片刻,,使細(xì)胞沉降到計(jì)數(shù)板上,不再隨液體漂移,。將血球計(jì)數(shù)板放置于顯微鏡的載物臺上夾穩(wěn),,先在低倍鏡下找到計(jì)數(shù)區(qū)后,再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計(jì)數(shù),。由于生活細(xì)胞的折光率和水的折光率相近,,觀察時應(yīng)減弱光照的強(qiáng)度。
5.計(jì)數(shù)時若計(jì)數(shù)區(qū)是由16個大方格組成,,按對角線方位,,數(shù)左上、左下,、右上,、右下的4個大方格(即100小格)的菌數(shù)。如果是25個大方格組成的計(jì)數(shù)區(qū),,除數(shù)上述四個大方格外,,還需數(shù)中央1個大方格的血球計(jì)數(shù)板。菌數(shù)(即80個小格),。為了保證計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性,,避免重復(fù)計(jì)數(shù)和漏記,,在計(jì)數(shù)時,,對沉降在格線上的細(xì)胞的統(tǒng)計(jì)應(yīng)有統(tǒng)一的規(guī)定,。如菌體位于大方格的雙線上,計(jì)數(shù)時則數(shù)上線不數(shù)下線,,數(shù)左線不數(shù)右線,,以減少誤差。即位于本格上線和左線上的細(xì)胞計(jì)入本格,,本格的下線和右線上的細(xì)胞按規(guī)定計(jì)入相應(yīng)的格中,。見右圖:即本格中計(jì)數(shù)細(xì)胞為3個。
6.對于出芽的酵母菌,,芽體達(dá)到母細(xì)胞大小一半時,,即可作為兩個菌體計(jì)算。每個樣品重復(fù)計(jì)數(shù)2-3次(每次數(shù)值不應(yīng)相差過大,,否則應(yīng)重新操作),,按公式計(jì)算出每mL(g)菌懸液所含細(xì)胞數(shù)量。
7.測數(shù)完畢,,取下蓋玻片,,用水將血球計(jì)數(shù)板沖洗干凈,切勿用硬物洗刷或抹擦,,以免損壞網(wǎng)格刻度,。洗凈后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干,放入盒內(nèi)保存,。
材質(zhì):載玻片是在實(shí)驗(yàn)時用來放置實(shí)驗(yàn)材料的玻璃片,,呈長方形,較厚,,透光性較好,;蓋玻片是蓋在材料上,避免液體和物鏡相接觸,,以免污染物鏡,,呈正方形,較薄,,透光性較好,。
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