一．開機程序
1． 檢查穩(wěn)壓器電源,，打開電源,，穩(wěn)定5分鐘,。
2． 打開儲液箱,，倒掉廢液, 并在廢液桶中加入400ml漂白水原液,。打開壓力閥，取出鞘液桶,，將鞘液桶加至4/5滿（一般可用三蒸水,，做分選必須用PBS或FACSFlow），合上壓力閥,。確實蓋緊桶蓋,，檢查所有管路是否妥善安置,。
3． 將FACSCalibur開關打開，此時儀器功能控制鈕的顯示應是STANDBY,，預熱5－10分鐘,。排出過濾器內(nèi)的氣泡。
4． 如果需要打印,，打開打印機電源,。
5． 打開電腦,等待屏幕顯示出標準的蘋果標志。
6． 執(zhí)行儀器PRIME功能一次,，以排除Flow cell中的氣泡,。
7． 分析樣品時，先用FACAFlow 或PBS進行HIGH RUN約2分鐘,。
X,。做過分選后，每次開機后需沖洗管道：向分選裝置上裝上兩個50ml離心管,，不接通濃縮系統(tǒng),，摁下右下角白色按鈕開始沖洗。待自動停止后接通濃縮裝置,，同上法沖洗一次,。
二． 預設獲取模式文件(Acquisition Template Files)
1． 從蘋果標志中選擇CELLQuest見一個新視窗，可利用此視窗編輯一個獲取模式文件,。
2． 選取屏幕左列繪圖工具中的Dot plot,，繪出一個或多個Dot Plots（點圖）。從Dot Plot對話框中選取Acquisition作為圖形資料來源,，并確定適當?shù)膞軸和y軸參數(shù),。
3． 選取屏幕左列繪圖工具中的Histogram，同上法可繪出Histogram（直方圖）,。
4． 將此視窗命名后儲存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder \EXP文件夾中,，下次進行相同實驗時可直接調(diào)用。
X. 本計算機中已設定兩個模式文件：ACQ和EXP,，儲存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夾中,，ACQ用于細胞DNA檢測，EXP用于細胞表面標志分析,。
三． 用CELLQuest進行儀器的設定和調(diào)整
1． 從蘋果畫面中選取CELLQuest,，進入CELLQuest后在File指令欄中打開合適的獲取模式文件。
2． 從屏幕上方Acquire指令欄中,，選取Connect to Cytometer（快捷鍵： ＋B）進行電腦和儀器的連機,。將出現(xiàn)的Acquisiton Control對話框移至合適位置,。
3． 從Cytometer指令欄中,，開啟Detectors/Amps,、Threshold、Compensation,、Status等四個對話框,，并將它們移至屏幕右方，以便獲取數(shù)據(jù)時隨時調(diào)整獲取條件,。也可以用 +1,，2，3,，4獲得此四個對話框,。
4． 在Detectors/Amps對話框中，先為每個參數(shù)選擇適當?shù)谋对瞿Ｊ?amplifier mode)：線性模式Lin或?qū)?shù)模式Log,。一般進行細胞表面抗原分析如分析外周血的淋巴細胞亞群時,，F(xiàn)SC和SSC多以線性模式Lin測量，且DDM Param選擇FL2,，而FL1, FL2與FL3則以對數(shù)模式Log測量,；分析細胞DNA含量時，F(xiàn)SC,，SSC,，F(xiàn)L1，F(xiàn)L2,，F(xiàn)L3皆以Lin進行測量,，且DDM Param選擇FL2；分析血小板表型時,，F(xiàn)SC,，SSC，F(xiàn)L1,，F(xiàn)L2,，F(xiàn)L3等均以Log進行測量。
5． 放上待檢測的樣品,，將流式細胞儀設定于RUN,，流速可在HIGH 或LOW上。
6． 在Acquisiton Control對話框中,，選取Acquire,，開始獲取細胞。在以下的儀器調(diào)整過程中隨時選取Pause,，Restart以觀察調(diào)整效果,。未完全調(diào)整好之前不要去掉SETUP前的“3”。
7． 在Detectors/Amps對話框中，調(diào)整FSC和SSC探測器中的信號倍增度：PMT voltages（粗調(diào)）與Amp Gains（細調(diào)）,，使樣品信號出現(xiàn)在FSC-SSC點圖內(nèi),且三群細胞合理分布,。
8． 在Threshold 對話框中選擇適當?shù)膮?shù)設定Threshold，并調(diào)整Threshold的高低,，以減少噪音信號（細胞碎片）,。一般做細胞表型時用FSC－H而做DNA時用FL2－H。Threshold并不影響檢測器對信號的獲取,，但可改善畫面質(zhì)量,。
9． 從屏幕左列繪圖工具中選取Region（區(qū)域），并在靶細胞周圍設定區(qū)域線,，即通常所說的門,。圈定合適的細胞群可使儀器調(diào)整更為容易。
10． 在Detectors/Amps對話框中,，調(diào)整熒光檢測器（FL1, FL2, FL3, FL4等）的倍增程度,。根據(jù)所用的熒光陰性對照樣品調(diào)整細胞群，使之分布在正確的區(qū)域內(nèi),。
11． 在Compensation對話框中,，根據(jù)所用的調(diào)補償用標準熒光樣品調(diào)整雙色（或多色）熒光染色所需的熒光補償。比如應該為FL1+ FL2- 的細胞群卻分布在FL1＋ FL2＋區(qū)域內(nèi),，則需調(diào)大FL2－,？％FL1中的“？”,，并從FL1-FL2點圖中觀察新的調(diào)整是否恰當
12． 在Status對話框中可見：Laser Power:正常值—Run/Ready為14.7mW,，Standby為5mW；Laser current:正常值為6Amps左右,。
13． 調(diào)整好的儀器設定可在Instrument Settings對話框中儲存,，下次進行相同實驗時可調(diào)出使用，屆時只需微調(diào)即可,。
X. 本計算機中已有三個名叫儲存于FACStation G3 \BD Applications \CELLQuest Folder \IMM-InstrSettings及FACStation G3 \BD Files \Instrument Settings Files \CalibFile和Mast-Cell-Set的參數(shù)文件,，前二者可用于分析人白細胞，后者用于分析小鼠肥大細胞,。
四． 通過預設的獲取模式文件進行樣品分析
1． 從蘋果標志中選擇CELLQUEST,，新視窗出現(xiàn)后從File指令欄中選擇Open，打開預設的獲取模式文件,。
2． 從屏幕上方Acquire指令欄中,，選取Connect to Cytometer進行電腦和儀器的連機。將出現(xiàn)的Acquisiton Control對話框移至合適位置,。
3． 從Cytometer指令欄中選取Instrument Settings,，在其對話框中選擇Open以調(diào)出以前存儲的相同實驗的儀器設定,，按Set 確定。
4． 在Acquire指令欄中,，選擇Acquisition&Storage決定儲存的細胞數(shù),，參數(shù)，信號道數(shù),。其中Resolution在做細胞表面標志時選擇256，做DNA時選擇1024,。Parameter Saved…則根據(jù)不同的檢測對象選擇不同的參數(shù),。
5． 在Acquire指令欄中，選擇Parameter Description,，以決定文件存儲位置(folder),，文件名稱(file)，樣品代號以及各種參數(shù)的標記(panel),，即安排tube1,，2，3…的檢測參數(shù),。一般本儀器獲取的數(shù)據(jù)按照檢測對象的不同分別儲存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \IMM 和DNA 文件夾中,。文件根據(jù)日期命名。
6． 在Cytometer指令欄中,，選擇Counters,，將此對話框移至合適位置，以便于隨時觀察events計數(shù),。
7． 將樣品試管放至檢測區(qū),，在Acquire Control對話框中選取Acquire以啟動樣品分析測定。
8． 微調(diào)儀器設定,，待細胞群分布合適后選擇Acquire Control對話框中Pause, Abort, 去除Setup前的“3”,，開始正式獲取信號，存儲數(shù)據(jù),。
9． 當一定數(shù)目的細胞被測定后,，獲取會自動停止，并會自動存儲數(shù)據(jù),。重復步驟7,，繼續(xù)分析下一個樣品，直到所有的樣品數(shù)據(jù)分析完畢,。
X. 當所有樣品分析分析完畢,，即換上三蒸水，并將流式細胞儀置于“STANDBY”狀態(tài),，以保護激光管,。
五． 關機程序：
1． 從File中選擇Quit, 退出軟件，選擇Don’t Save至蘋果屏幕。
2． 用4ml 1：10稀釋的漂白水作樣品,，將樣品置于旁位（vacuum is on）,，以外管吸去約2ml，在將樣品架置于中位（vacuum is off）,，再HIGH RUN 5分鐘（內(nèi)管吸去2ml）,。
3． 改用三蒸水4ml作樣品,同上處理。
4． 按Prime三次,。
5． 此時儀器自動轉為STANDBY狀態(tài),，換2ml三蒸水。必須在儀器處于“STANDBY”狀態(tài) 10分鐘后再依次關掉計算機,、打印機,、主機、穩(wěn)壓電源,，以延長激光管壽命,，并確保應用軟件的正常運行。
6． 填寫使用登記表,。
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