在RIA反應(yīng)中，標記抗原和特異性抗體的含量極微,，形成的標記抗原抗體復(fù)合物(B)不能自行沉淀,，因此需用一種合適的沉淀劑使它徹底沉淀，以完成與游離標記抗原(F)的分離,。另外對小分子量的抗原也可采
取吸附法使B與F分離,。
 
    1．第2抗體沉淀法  這是RIA中最常用的一種沉淀方法。將產(chǎn)生特異性抗體(第l抗體)的動物(例如兔)的IgG免疫另一種動物(例如羊),，制得羊抗兔IgG血清(第2抗體),。由于在本反應(yīng)系統(tǒng)中采用第1、第2兩種抗體,，故稱為雙抗體法,。在抗原與特異性抗體反應(yīng)后加入第2抗體，形成由抗原—第1抗體—第2抗體組成的雙抗體復(fù)合物,。但因第1抗體濃度甚低,，其復(fù)合物亦極少，無法進行離心分離,，為此在分離時加人一定量的與第1抗體同種動物的血清或IgG,，使之與第2抗體形成可見的沉淀物，與上述抗原的雙抗體復(fù)合物形成共沉淀,。經(jīng)離心即可使含有結(jié)合態(tài)抗原(B)的沉淀物沉淀,，與上清液中的游離標記抗原(F)分離。
 
    將第2抗體結(jié)合在顆粒狀的固相載體之上即成為固相第2抗體,。利用固相第2抗體分離B,、F，操作簡便、快速,。
 
    2．聚乙二醇(PEG)沉淀法  最近各種RIA反應(yīng)系統(tǒng)逐漸采用了PEG溶液代替第2抗體作沉淀劑,。PEG沉淀劑的主要優(yōu)點是制備方便，沉淀完全,。缺點是非常特異性結(jié)合率比用第2抗體為高,，且溫度高于30℃時沉淀物容易復(fù)溶。
 
    3,。PR試劑法  是一種將雙抗體與PEG二法相結(jié)合的方法,。此法保持了兩者的優(yōu)點，節(jié)省了兩者的用量,，而且分離快速,、簡便。
 
    4．活性炭吸附法  小分子游離抗原或半抗原被活性炭吸附,，大分子復(fù)合物留在溶液中,。如在活性炭表面涂上一層葡聚糖，使它表面具有一定孔徑的網(wǎng)眼,，效果更好,。在抗原與特異性抗體反應(yīng)后，加入葡聚糖—活性炭,。放置5～10rain,，使游離抗原吸附在活性炭顆粒上，離心使顆粒沉淀,，上清液中含有結(jié)合的標記抗原,。此法適用于測定類固醇激素，強心苷和各種藥物,，因為它們是相對非極性的,，又比抗原抗體復(fù)合物小，易被活性炭吸附,。
http://bbs.aibaoyl.com/