將標(biāo)本經(jīng)過(guò)三氯醋酸進(jìn)行處理,然后提出細(xì)胞內(nèi)的核酸后,用不同的ph值的固綠染液,,分別對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色處理,如此便可以將細(xì)胞內(nèi)的酸性蛋白質(zhì)顯現(xiàn)和區(qū)分出來(lái),。這是我們常用的區(qū)分以及判斷細(xì)胞內(nèi),,酸性蛋白質(zhì)和堿性蛋白質(zhì)的基本方法,并且這樣一種方法也有實(shí)驗(yàn)依據(jù),。
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通常是通過(guò)轉(zhuǎn)換細(xì)胞的方法來(lái)進(jìn)行判斷,,主要步驟如下:首先需要以破壞脊髓的方法處死蟾蜍,將蟾蜍的腹部向上放入蠟盤中,,然后剪開胸腔,,打開心包部位。再小心的在心臟上剪出一個(gè)小口,,取出心臟血,,將其中一滴滴在載玻片的一端,然后推片,。按照這樣一種方法,,再做第二個(gè)血涂片,在室溫的條件下進(jìn)行晾干處理,。
將所做好的涂片放在70%乙醇中進(jìn)行固定,,五分鐘時(shí)間即可,然后在室溫條件下晾干,。第三步就是放入5%的三氯醋酸中,,需要保證溫度為60℃,時(shí)間為30分鐘,,然后抽提出細(xì)胞內(nèi)的核酸,。第四步為清洗,需要多次進(jìn)行清洗,,清洗時(shí)間達(dá)三分鐘以上,,主要目的是沖洗痕跡的三氯醋酸。然后用濾紙吸干在玻片上的水分,。第五步,,將其中一張片上放入0.1%的堿性固綠中進(jìn)行染色,染色時(shí)間為10到15分鐘,另一張片上放入0.1%的酸性固綠,,時(shí)間為5至10分鐘,。然后進(jìn)行沖洗,蓋上蓋片鏡檢,。
轉(zhuǎn)化細(xì)胞的結(jié)果就是在經(jīng)過(guò)堿性固綠染色片中,,細(xì)胞質(zhì)以及核仁不著色,然后大部分的細(xì)胞核都被染成綠色,,這就是堿性蛋白質(zhì)的所在處,。然后在經(jīng)過(guò)酸性顧慮染色片中,因?yàn)榧?xì)胞質(zhì)以及核仁中含有酸性蛋白質(zhì),,所以最終會(huì)被染成綠色,。這是一種操作比較簡(jiǎn)便的方法,同時(shí)實(shí)驗(yàn)所需成本也并不高,。