導(dǎo)讀：課題研究人員則通過創(chuàng)新性研究,，研究開發(fā)出了區(qū)分病原細(xì)菌活性的EMA real-time PCR檢測方法,，為種子帶菌尤其是活菌的檢測提供了可能。首次將EMA這類DNA雙鏈結(jié)合染料用于植物病原細(xì)菌的檢測技術(shù),，建立了能區(qū)分病原細(xì)菌活性的基于核酸的PCR檢測技術(shù),。
6月份正值番茄新鮮上市的時(shí)候。番茄因其營養(yǎng)豐富,、酸甜可口而廣受人們的喜愛,。但番茄潰瘍病卻給番茄生產(chǎn)帶來嚴(yán)重威脅，該病害在歷史上曾使北美和歐洲的加工番茄生產(chǎn)受到毀滅性打擊,，直接影響番茄醬的總產(chǎn)量和價(jià)格走勢(shì),，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，從而備受生產(chǎn)者和研究人員關(guān)注,。
在國家自然基金的資助下,，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理學(xué)系教授李健強(qiáng)帶領(lǐng)的研究團(tuán)隊(duì)經(jīng)過多年研究，建立了番茄潰瘍病菌快速靈敏的分子檢測方法,，為生產(chǎn)中病菌的鑒定和田間病害的診斷提供了可靠依據(jù),。
番茄潰瘍病是“紅色產(chǎn)業(yè)”的最大殺手
番茄潰瘍病是由密執(zhí)安棒桿菌密執(zhí)安亞種（Cmm）引起的一種重要的細(xì)菌病害，目前還沒有快速有效的防治辦法,。番茄潰瘍病主要通過種子帶菌實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)距離傳播,，主要癥狀表現(xiàn)為：葉片壞死、莖稈開裂,、潰瘍,、植株整株枯死等。
該病自1909年首次在美國發(fā)現(xiàn)以來,，發(fā)生頻繁,，現(xiàn)已廣泛分布于世界各番茄產(chǎn)區(qū)。在我國,，近年來每年均有發(fā)生,，且呈逐年擴(kuò)散和加重的趨勢(shì)。其中尤以甘肅,、新疆,、內(nèi)蒙古、河北等省區(qū)為甚。
“目前生產(chǎn)中沒有針對(duì)這類病害的特效防治藥劑,，該病害發(fā)生嚴(yán)重時(shí)可造成產(chǎn)量損失80%以上甚至絕收,。”李健強(qiáng)擔(dān)憂地說，“如果不加以控制,，該病害將是我國新疆等地 紅色產(chǎn)業(yè) 的最大潛在危害,，嚴(yán)重威脅我國番茄制種業(yè)的發(fā)展和加工番茄、食用番茄的大田生產(chǎn),。”
提高病菌分子檢測效率
發(fā)病番茄的幼苗,、葉片、莖稈,、果實(shí)等均可表現(xiàn)潰瘍病癥狀,。病原細(xì)菌可在種子內(nèi)外及病殘?bào)w上越冬，在病殘?bào)w上存活時(shí)間最多可達(dá)3年左右,。傳統(tǒng)的植物病原細(xì)菌診斷要經(jīng)過分離培養(yǎng),、病原菌致病性測定、生理生化鑒定等一系列繁雜步驟,，時(shí)間冗長,，無法滿足制種田、生產(chǎn)田和種子公司大規(guī)?？焖贆z驗(yàn)的需要,。李健強(qiáng)告訴記者，近年來隨著分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展,，核酸雜交和PCR技術(shù)為快速,、高靈敏度地鑒定植物病原細(xì)菌提供了可能。
課題研究人員通過亞種特異性引物的設(shè)計(jì)及PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化,、檢測靈敏度和特異性研究,，建立了快速靈敏的番茄潰瘍病菌分子檢測方法，并首創(chuàng)了區(qū)分植物病原細(xì)菌死,、活細(xì)胞的EMA-PCR檢測技術(shù),。
據(jù)李健強(qiáng)介紹，課題組研究人員設(shè)計(jì)開發(fā)出的具有亞種特異性的引物,，能高靈敏度,、特異性地檢測番茄潰瘍病菌,，且對(duì)目前研究中供試的100余株國內(nèi)外菌株均適用,，較國外已報(bào)道的基于質(zhì)粒上的基因設(shè)計(jì)的引物適用范圍更廣。
番茄潰瘍病菌分子檢測取得首創(chuàng)性突破
李健強(qiáng)告訴記者,，國外對(duì)番茄潰瘍病的研究包括病害的發(fā)生與防治,、病原菌的生物學(xué)及檢測技術(shù)、病原菌的致病機(jī)制等方面，國內(nèi)之前的研究多集中在病害的發(fā)生危害方面,。
課題研究人員則通過創(chuàng)新性研究,，研究開發(fā)出了區(qū)分病原細(xì)菌活性的EMA real-time PCR檢測方法，為種子帶菌尤其是活菌的檢測提供了可能,。首次將EMA這類DNA雙鏈結(jié)合染料用于植物病原細(xì)菌的檢測技術(shù),，建立了能區(qū)分病原細(xì)菌活性的基于核酸的PCR檢測技術(shù)。
對(duì)于下一步將要開展的工作,，李健強(qiáng)表示,，希望對(duì)種子傳帶活菌的定量分子檢測技術(shù)進(jìn)行優(yōu)化，并對(duì)番茄潰瘍病菌在田間自然條件下的存活狀態(tài)及田間病害主要初侵染來源進(jìn)行分析,。（生物谷bioon.net）
