由福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所承擔(dān)的省科技計(jì)劃項(xiàng)目“轉(zhuǎn)基因水稻的快速檢測技術(shù)研究”通過了省科技廳組織的專家驗(yàn)收,。
該項(xiàng)目選取了BT類抗蟲基因cry1Ac,、cry1Ca,、cry30FAa1基因,以及豇豆胰蛋白酶抑制劑基因cpti與潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記基因hpt,,構(gòu)建細(xì)菌表達(dá)載體并純化了目的蛋白,,制備了Cry1Ac、Cry1Ca,、Hpt,、CPTI蛋白的多克隆抗體,進(jìn)行了Cry1Ab,、Cry1Ac,、Hpt蛋白的單克隆抗體制備。
建立了膠體金標(biāo)記檢測試紙條技術(shù)體系,,針對試紙條制備中膠體金顆粒的大小,,膠體金標(biāo)記蛋白最適用量與pH值,,不同膜材的選擇,試紙條規(guī)格,,包被液與膠體金重懸液組分等進(jìn)行了優(yōu)化,,探索了最佳制備工藝,制備了Cry1Ac,、Cry1Ca與CPTI的轉(zhuǎn)基因檢測試紙條,,并制訂了試紙條中試生產(chǎn)技術(shù)資料與檢測說明書。
通過該技術(shù)制備的膠體金試紙條檢測轉(zhuǎn)cry1Ac與cpti基因水稻植株,,與ELISA結(jié)果比較發(fā)現(xiàn),,Cry1Ac試紙條靈敏度為96.0%,特異性為100%,,符合率為96.1%,;CPTI試紙條靈敏度為91.8%,特異性為94.8%,,符合率為93.0%,。為轉(zhuǎn)基因水稻選育過程中的檢測奠定基礎(chǔ)。(生物谷 bioon.com)