使用16×25規(guī)格的計(jì)數(shù)板時(shí)，只計(jì)板上四個(gè)角上的4個(gè)中格（即100個(gè)小格）,，如果使用25×16規(guī)格的計(jì)數(shù)板時(shí),，除計(jì)四個(gè)角上的4個(gè)中格外，還需要計(jì)中央一個(gè)中格的數(shù)目（即80個(gè)小格）,。每個(gè)樣品重復(fù)觀察計(jì)數(shù)不少于2次,，然后取其平均值。
計(jì)算
（1）16×25的計(jì)數(shù)板
孢子數(shù)（個(gè)/g）=(N/100) ×400×10000×(V/G)=4×104×(NV/G)…………（1）
式中 N——100小格內(nèi)孢子總數(shù) （個(gè)）
V——孢子稀釋液體積 （ml）
G——樣品重量 （g）
（2） 25×16的計(jì)數(shù)板
孢子數(shù)（個(gè)/g）=(N/80) ×400×10000×(V/G)=5×104×(NV/G) …………………………（2）
式中 N——80小格內(nèi)孢子總數(shù) （個(gè)）
V——孢子稀釋液體積 （ml）
G——樣品重量 （g）
1．將血細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入下表,。
計(jì) 算
次 數(shù) 4個(gè)大方格白細(xì)胞數(shù) 5個(gè)大方格紅細(xì)胞數(shù)
1 2 3 4 總數(shù) 1 2 3 4 5 總數(shù)
第1次
第2次
兩次平
均總數(shù)
血細(xì)胞
計(jì) 數(shù)
4．充液
2類血細(xì)胞計(jì)數(shù)分2次充液,，方法如下。
（1）取干凈的計(jì)數(shù)板平放于實(shí)驗(yàn)桌上,，將蓋玻片置入計(jì)數(shù)板正中央,。★計(jì)數(shù)板和蓋玻片在使用前必須用軟綢或擦鏡紙擦凈,，并在低倍鏡下檢查計(jì)數(shù)室是否干凈,，其刻度是否清晰。用小滴管吸取稀釋血液,，并將管尖輕輕斜置于蓋玻片邊緣,，讓稀釋血液緩慢流出，借毛細(xì)管現(xiàn)象而自動流入計(jì)數(shù)室內(nèi),。一般應(yīng)一次充液使計(jì)數(shù)室內(nèi)充滿稀釋血液,，若經(jīng)幾次充液,，易形成氣泡,，應(yīng)洗凈計(jì)數(shù)板和蓋玻片，干燥后重新充液,。
（2）稀釋的血液充入計(jì)數(shù)室后,，靜置2～3min，待細(xì)胞不再浮動后,，于低倍鏡下計(jì)數(shù),。
5．計(jì)數(shù)
為防止重復(fù)計(jì)數(shù)和漏數(shù)，計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)遵循一定的順序進(jìn)行，即“從左到右,，自上而下”,；對正好壓在格線上的血細(xì)胞，依照“數(shù)上不數(shù)下,，數(shù)左不數(shù)右”的原則進(jìn)行計(jì)數(shù)（圖3-2）,。
如計(jì)數(shù)白細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn)各大方格的白細(xì)胞數(shù)相差8個(gè)以上，計(jì)數(shù)紅細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn)各中方格的紅細(xì)胞數(shù)最多與最少相差20個(gè)以上時(shí),，則表示血細(xì)胞分布不均勻,，必須將稀釋的血液搖勻后再重新充入計(jì)數(shù)室計(jì)數(shù)。
6．計(jì)算
（1）白細(xì)胞數(shù) 將四角的4個(gè)大方格內(nèi)數(shù)得的白細(xì)胞總數(shù)乘以50,，即得每立方毫米血液內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù),，也可將對角兩個(gè)大方格內(nèi)數(shù)得的白細(xì)胞總數(shù)乘以100。因?yàn)椋?/div>
稀釋液0.38mL加入血液20mm3（1mL＝1000mm3,，
故20mm3＝0.02mL,）,，使血液稀釋20倍，換算成未稀釋血時(shí)應(yīng)乘以20,。
在計(jì)數(shù)時(shí)僅統(tǒng)計(jì)四角的4個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞,，其容積為lmm×1mm×0.1mm×4＝0.4mm3，換算成每立方毫米時(shí)應(yīng)乘以2.5,。這樣,，把四角4個(gè)大方格內(nèi)數(shù)得的白細(xì)胞總數(shù)乘以50（即20×2.5＝50），即得每立方毫米血內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù),。
（2）紅細(xì)胞數(shù) 將中央大方格中的四角和中央的中方格共5個(gè)中方格內(nèi)數(shù)得的紅細(xì)胞總數(shù)乘以10 000,，即得每立方毫米血內(nèi)紅細(xì)胞的總數(shù)。因?yàn)椋?/div>
稀釋液3.98mL,，加入血20mm3（即0.02mL）,，使血液稀釋200倍，換算成未稀釋血時(shí)應(yīng)乘以200,。
在計(jì)數(shù)時(shí)僅統(tǒng)計(jì)0.02 mm3內(nèi)的紅細(xì)胞（1個(gè)中方格的容積為0.2mm×0.2mm×0.1mm＝0.004mm3,，5個(gè)中方格的容積為0.004mm3×5＝0.02mm3），換算成每立方毫米時(shí)應(yīng)乘以50,。這樣把5個(gè)中方格內(nèi)數(shù)得的紅細(xì)胞總數(shù)乘以10 000（即200×50＝10000）,，即得每立方毫米血內(nèi)的紅細(xì)胞總數(shù)。
（3）按目前臨床上血細(xì)胞計(jì)數(shù)采用的通用單位,，將以上所獲每毫升血液中所含各血細(xì)胞數(shù)量換算為各血細(xì)胞在每升血液中的數(shù)量,。
7．清洗血細(xì)胞計(jì)數(shù)板
蓋玻片及計(jì)數(shù)板用過之后，必須立即用水沖洗,，但不可用硬物刷洗,。計(jì)數(shù)板晾干或吹風(fēng)機(jī)吹干后，應(yīng)鏡檢計(jì)數(shù)室是否干凈，如不干凈必須重復(fù)洗至干凈為止,。
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(文/孫小姐)
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