一,、步驟

1、制備細(xì)胞懸液：對于懸液培養(yǎng)的細(xì)胞,，可直接進(jìn)行下面的步驟2（計(jì)數(shù)與計(jì)算過程）,。如果計(jì)數(shù)對象為貼壁生長的細(xì)胞，首先需將培養(yǎng)物按如下步驟制備成細(xì)胞懸液,。

1）,、終止培養(yǎng)，將培養(yǎng)液吸出,，用PBS洗培養(yǎng)物一次,。

2）、給培養(yǎng)瓶內(nèi)加入1ml 0.25％胰蛋白酶溶液,，于37℃消化3～5min ,。期間不斷在鏡下觀察。當(dāng)細(xì)胞變圓接近脫壁時,，棄消化液,。

3）、加入一定量的培養(yǎng)液（如果這些培養(yǎng)細(xì)胞不再有用,，可加PBS）,，用吸管吹打，使細(xì)胞脫壁而制成細(xì)胞懸液,。

2,、計(jì)數(shù)與計(jì)算過程

1）、在細(xì)胞計(jì)數(shù)板中央放置計(jì)數(shù)專用的蓋玻片,。

2）、用玻璃虹吸管吸取細(xì)胞,，讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計(jì)數(shù)板凹蹧處流出懸液,，至蓋玻片被液體充滿為止。

3）,、置顯微鏡下計(jì)數(shù)四角大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù),。對于壓線的細(xì)胞只計(jì)數(shù)在上線和左線者，對于細(xì)胞團(tuán)按單個細(xì)胞計(jì)數(shù),。

4）,、按下式計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液的密度：細(xì)胞密度＝（4個大格細(xì)胞總數(shù)/4）×104個/ml 。

二、注意事項(xiàng)：

1）,、務(wù)必使分散成單個細(xì)胞,，取樣計(jì)數(shù)前，充分混勻細(xì)胞懸液,。

2）,、顯微鏡下計(jì)數(shù)時，遇到2個以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán),，應(yīng)按單個細(xì)胞計(jì)算,。如果細(xì)胞團(tuán)>10％，說明細(xì)胞分散不充分,。


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